参会研究

　　近年来，循环肿瘤细胞（CTC）检测技术飞速发展，在各类肿瘤诊断治疗中的应用也不断丰富。在膀胱肿瘤中，有国外学者通过上皮细胞粘附分子（EpCAM）标记CTC细胞，结果发现CTC阳性患者的总生存率显著较低，揭示了CTC在临床应用中的价值。目前，CTC和临床病理分期的关系，以及对于CTC精准分型的研究，是国内外学者研究的热点。

　　上海交通大学医学院附属仁济医院膀胱肿瘤诊治中心自2015年开展了膀胱肿瘤患者CTC细胞检测，同时基于膀胱肿瘤细胞上皮间质转化理论，通过合成上皮和间质细胞特异性探针，对分离所得膀胱肿瘤CTC细胞进行精准分型。发现CTC细胞具有不同的上皮/间质表型，而间质表型细胞的出现明显和患者肿瘤肌层浸润和病理高分期相关。

　　本研究初步揭示了CTC和临床病理分期的关联性，并对间质表型CTC和EMT通路在膀胱肿瘤肌层浸润与转移中具有的潜在作用，为后续临床与基础研究提供了方向。

　　EAU会议膀胱肿瘤研究进展点评

　　我们主要关注领域是膀胱肿瘤，下面简单谈一下本次会议在肌层浸润性膀胱癌和非肌层浸润型膀胱肿瘤方面的进展。在当今“精准医疗”的大趋势下，本次EAU年会涌现了一批高质量的通过精准化检测与大数据分析方法来对肿瘤进行进精准化诊断和治疗的研究，其中最让我印象深刻的是本次会议数项关于肌层浸润型膀胱肿瘤的精准分子分型的研究。

　　现今，随着手术、新辅助化疗、免疫治疗等治疗手段的进步，肿瘤的异质性被学界普遍关注，在TMN分期和组织学分型之外，亟需在基因层面根据肿瘤生物学特性进行再次分类，以指导患者治疗方案和随访计划。膀胱肿瘤的分子分型因此应运而生，其中美国MD Anderson、TCGA、法国居里中心和瑞典Lund大学对此都有较高水准的研究结果发表。

　　然而，传统的分子分型主要通过高通量检测技术完成，在临床应用上具有一定局限性。本次EAU会议上，来自欧洲研究中心的一项报道对于如何通过临床病理学手段来界定一些特殊的病理类型并以此制定治疗决策开展了相关的研究，对于分子分型在临床开展具有较大意义。我中心每年开展200余例肌层浸润型膀胱癌的根治性全膀胱切除手术，对于此类患者的预后的异质性，我们一直密切关注，并力求找到其基因和分子机制。自2014年开始，我中心积极开展了膀胱肿瘤分子分型的相关研究工作，以根据不同分子亚型制定个性化的治疗。

　　陈海戈  副教授

　　副主任医师，副教授，上海交通大学医学院附属仁济医院（东院）膀胱肿瘤组负责人。学术任职：中华医学会泌尿外科分会国际交流部委员，中华医学会泌尿外科上海分会青年委员，中华医学会泌尿外科上海分会专科医师培训组秘书。陈海戈教授所带领的团队是中国膀胱癌联盟（CBCC）牵头单位之一，参与编写了2013年中国膀胱癌诊疗指南，该指南为业内膀胱癌诊疗的专业规范。在我国最早开展并推广高危表浅肿瘤二次电切及电切术后即刻灌注化疗。2014年作为共同参与人获得上海市科学技术二等奖一项。

　　研究摘要：新型循环肿瘤细胞计数与上皮/间质型探针标记技术在膀胱癌中的临床应用研究

　　张瑞赟，陈海戈，金迪，董樑，杨国良，张连华，曹明，薛蔚，黄翼然

　　上海交通大学医学院附属仁济医院，泌尿科，200127

　　目的：循环肿瘤细胞（CTC）检测及计数技术是近年来发展较快的肿瘤临床检测新技术，然而国内外少见应用于膀胱肿瘤。国外学者曾对膀胱肿瘤患者进行CTC检测发现术前CTC阳性是预后较差的独立危险因素。肿瘤细胞上皮-间质转化（EMT）被认为在肿瘤侵袭与转移过程中具有重要作用，但是目前对于循环肿瘤细胞EMT研究较局限，对于膀胱肿瘤国内外未见相关报道。本研究旨在探索在膀胱肿瘤中，新型循环肿瘤细胞（CTC）计数技术与基于RNA原位杂交的上皮/间质型探针标记技术的临床应用价值，初步探索上皮-间质转化在循环肿瘤细胞中的作用及其与膀胱肿瘤肌层浸润的关系。

　　方法：本研究纳入cT1-T4N0M0 期初诊高危膀胱肿瘤患者68名，和25名健康志愿者与13名临床未发现恶性肿瘤的良性疾病患者作为对照。采集受试者外周血10 ml，采用改良CanPatrolTM 法分离富集CTC，应用上皮型肿瘤细胞（Epi）特异性探针（EpCAM、CK5/7/18/19、CDH1）和间质型肿瘤细胞（Mes）特异性探针（Twist、CDH2、SERPINE1、Vimentin）通过RNA原位杂交（RNA-ISH）对分离得到的CTC细胞进行标记。同时收集膀胱肿瘤患者的基本情况、临床资料、病理结果以进行后续分析。

　　结果：46位患者接受了根治性膀胱切除术，22位患者接受保留膀胱治疗。2名患者因病理类型非尿路上皮癌，1位患者因合并前列腺腺癌而被剔除出研究队列。队列中患者病理诊断都为高级别尿路上皮癌，病理分期包含pTa至pT4期。CTC在80%的膀胱肿瘤患者中阳性，25例健康志愿者皆阴性，3例良性疾病患者CTC阳性(P<0.001)。在RNA-ISH检测中，肌层浸润型膀胱癌（≥pT2）患者的CTC总数（P= 0.002），Epi+Mes+细胞数量(P <0.001)及Epi-Mes+细胞数量(P = 0.033)较非肌层浸润性膀胱癌（≤pT1）患者显著增多，Epi+Mes-细胞数量未见显著性差异（P= 0.188）。其中pT2患者的CTCs总数 (P= 0.038) 与Epi+Mes+ 细胞数量 (P <0.017) 显著高于pT1 患者。

　　结论：新型循环肿瘤细胞（CTC）计数与基于RNA原位杂交的上皮/间质型探针标记技术可较敏感地检测出膀胱癌患者循环肿瘤细胞。CTC细胞数量与表达间质型表型RNA阳性（Mes+）的细胞数量可能与肿瘤肌层浸润相关，提示EMT与膀胱肿瘤肌层浸润可能存在相关性。

　　黄吉炜博士（左）、陈海戈教授（中）、张瑞赟博士（右）

　　张瑞赟博士，住院医师，法国ENS Cachan与Paris Sud大学肿瘤学硕士，目前师从黄翼然教授从事泌尿系统肿瘤，尤其是膀胱肿瘤的临床与转化医学研究工作。曾获国家留学基金委资助公费前往法国居里癌症研究中心学习，并荣获法兰西医学科学院奖学金。

研究摘要

395: Novel circulating tumour cell enumeration and epithelial/mesenchymal probe marking technique in bladder cancer

Introduction & Objectives：Circulating Tumor Cells (CTCs) detection and enumeration technique has developed rapidly in recent years. Some studies used EpCAM marked CTCs have carried out to predict overall survival but failed to show the correlation with pathological outcomes. Epithelial Mesenchymal Transition (EMT) of tumour cells is considered to play an important role in tumour invasion and metastasis. In this study， we aimed to explore the diagnostic use of novel CTCs enumeration and epithelial/mesenchymal probe marking technique in Bladder Urothelial Cancer (BCa) and correlation between CTCs and pathological outcomes.

Material & Methods：We included 68 patients with primary diagnosed BCa (cT1-T4N0M0) from 2015.1 to 2015.7 in our institution， while incorporating 24 healthy volunteers and 13 patients with benign disease as controls. Subjects underwent blood draws of 10ml peripheral blood 10 days after the first Transurethral Resection (TUR). CTCs were separated with CanPatrolTM?System. RNA in Situ Hybridization (RNA-ISH) was performed with Epithelial tumour cells (Epi) specific probes (EpCAM， CK5/7/18/19， CDH1) and Mesenchymal tumour cells (Mes) specific probe (Twist， CDH2， SERPINE1， Vimentin) on isolated CTCs cells. Patients’ demographics， clinical data， pathological outcomes were simultaneously collected in institutional board approved databases and analysed.

Results：46 patients received radical cystectomy and ?22 patients received intra-vesical chemotherapy. 2 patients were excluded because of the pathology diagnosis other than urothelial carcinoma （one was adenocarcinoma and the other was undifferentiated carcinoma). 1 patient was also excluded because of simultaneous prostate carcinoma. All patients are diagnosed with high-grade urothelial carcinoma in all pathology stage (pTa:4， pT1:27， pT2:23， pT3:8， pT4:3 ). 7 of them were diagnosed of concomitant carcinoma in situ in pathology review. CTCs were positive in 52 patients (80%， 5.48±6.68) with BCa， while all negative (0%， 0) in healthy volunteers， 3 patients were positive (23%， 0.31±0.63) in patients with benign disease (p <0.001). In RNA-ISH assay， we observed that patients with muscle invasive bladder cancer (≥pT2) has significantly more CTCs (p = 0.002)， more Epi+Mes+ CTCs cells (p <0.001) and more Epi-Mes+ CTCs cells (p = 0.033) compared with those with non-muscle invasive bladder cancer (≤pT1)， while Epi+Mes- cell number had no significant difference (p = 0.188). Further analysis showed that the pT2?patients had significantly more CTCs (p = 0.038) and more Epi+Mes+ CTCs cells (p <0.017) than pT1?patients.

Conclusions：The novel CTCs enumeration and RNA-ISH based epithelial/mesenchymal probe marking technique could be a sensitive detection method in patients with bladder cancer. The increase of CTCs amount and Mes+ CTCs may be associated with muscle invasion， which suggested EMT could be related with invasion and metastasis in muscle invasive bladder cancer.